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            INVSc1

            文字:[大][中][小] 2017-9-24    瀏覽次數:3785    

                        INVSc1 Chemically Competent Cell 產品說明書




            產品規格 (CAT#: YC1050)

            INVSc1 Competent Cell:                                      100μl/支              保存: -80℃(3個月)

            pYES2 (control vector, 10 ng/μl)                              10μl               保存:-80℃(12個月)

            Carrier DNA (5 μg/μl)                                              100μl              保存:-20℃(12個月)

            PEG/LiAC:                                                                    5ml              保存:    4℃(12個月)


            基因型

            MATa his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52/MATα his3Δ1 leu2 trp1-289 ura3-52 


            產品說明

            INVSc1菌株是專門用來做重組蛋白表達的宿主酵母,pYES2質粒與INVSc1酵母配套使用,激活pYES2質粒的GAL1啟動子的轉錄進而啟動下游重組蛋白的表達。INVSc1為合子型,可直接通過PEG/LiAc將pYES2質粒轉化進入INVSc1細胞內。質粒pYES2的篩選標志為URA,可用SD-URA板進行篩選。INVSc1感受態細胞經特殊工藝制作,-80℃可保存三個月,pYES2質粒檢測轉化效率>104 cfu/μg DNA。

             

            操作方法

            1. 取100 μl冰上融化的INVSc1感受態細胞,依次加入預冷的目的質粒2-5 μg,Carrier DNA (95-100℃,5 min,快速冰浴,重復一次) 10 μl,PEG/LiAc 500 μl并吸打幾次混勻,30℃水浴30 min (15 min時翻轉6-8次混勻)。

            2. 將管放42℃水浴15 min (7.5 min時翻轉6-8次混勻)。

            3. 5000 rpm離心 40 s棄上清,ddH2O 400 μl 重懸,離心 30s棄上清。

            4. ddH2O 50 μl重懸,涂質粒篩選用:SD-U medium板,29℃培養48-96 h。



            注意事項

            1. 感受態細胞最好在冰上融化。

            2. 轉化高濃度的質??上鄳獪p少最終用于涂板的菌量。

            3. INVSc1酵母菌株對高溫敏感,最適生長溫度為27-30℃;高于31℃,生長速度和轉化效率呈指數下降。



            說明書下載

            INVSc1 Chemically Competent Cell 產品說明書


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